大量DNA產物純化試劑盒說明書

MaxiDNA Purification Kit

 大量DNA產物純化試劑盒

   目錄號：  YJ0517

   保   存：  室溫

   組分說明

                                         Cat.No.                  YJ0517

                                         KitSize                     50

                                        BufferPB                   60ml

                                        BufferPS                   15ml

                               BufferPW（concentrate）                10ml

                                        BufferEB                   10ml

                                     SpinColumnDL                   50

                                CollectionTube（2ml）                 50

  產品簡介

      本試劑盒采用新型硅基質膜技術，通過快速簡單的結合-洗滌-洗脫步驟即可從大量的 PCR 產物或酶反   應液（酶切，連接，探針標記等）中純化 50 bp-50 kb 的 DNA 片段，純化過程中可有效去除引物、寡核苷酸、酶等雜質，從而獲得高純度，高濃度，完整性好的 DNA 片段，回收率高達 90%。本試劑盒回收純化的 DNA 可 直接用于測序、連接和轉化、標記、體外轉錄等分子生物學實驗。

注意事項

1.  本試劑盒可無選擇性的回收溶液中所有 DNA 片段，如需選擇性回收特定片段，同時去除其他不同大小片段，請選擇我公司的膠回收試劑盒（YJ0524, 加 YJ2302，YJ0518 或 YJ0526）。

2.  *次使用前應按照試劑瓶標簽的說明在BufferPW中加入無水乙醇。

3.  使用前請檢查BufferPB是否出現結晶或者沉淀，如有結晶或者沉淀現象，可在37℃水浴幾分鐘，即可恢復澄清。

4． 回收率與初始DNA量和洗脫體積有關。

5． 所有離心步驟均為使用臺式離心機在室溫下離心。

自備：無水乙醇，離心管

               操作步驟

    1.   估計DNA反應液的體積，加入5倍體積的Buffer PB，充分混勻（如DNA反應體系為100μl，則加 入500μlBufferPB，無需去除石蠟油或礦物油）。

      注意：在加入BufferPB后檢測溶液的pH值，若pH值大于7.5，可向其中加入10-30μl 的3M醋酸鈉（pH5.0），從而將pH值調到5-7。

    2.    柱平衡：向已裝入收集管（CollectionTube）中的吸附柱（SpinColumnDL）中加入200μl Buffer PS，     12,000rpm（~13,400×g）離心2分鐘，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱重新放回收集管中。

    3.   將步驟1中所得溶液加入到已裝入收集管的吸附柱中，室溫放置2分鐘，12,000rpm離心1分鐘，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱放回收集管中。

注意：吸附柱容積為700μl，若樣品體積大于700μl可分批加入 。

    4.   向吸附柱中加入650 μl Buffer PW（使用前請先檢查是否已加入無水乙醇），12,000rpm離心1分鐘，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱放回收集管中。

 注意：如果純化的DNA用于鹽敏感實驗（例如平末端連接實驗或直接測序），建議加入BufferPW后靜置2-5分鐘再離心。

   5.  12,000rpm離心2分鐘，倒掉收集管中的廢液。將吸附柱置于室溫數分鐘，以*晾干。

   注意：這一步的目的是將吸附柱中殘余的乙醇去除，乙醇的殘留會影響后續的酶促反應（酶切、PCR等）。為確保下游實驗不受殘留乙醇的影響，建議將吸附柱開蓋，置于室溫放置數分鐘，以*晾干吸附材料中殘余的乙醇。

  6.   將吸附柱放到一個新離心管（自備）中，向吸附膜中間位置懸空滴加100 μl Buffer EB（pH 8.5），室溫放置2分鐘。12,000rpm離心1分鐘，收集DNA溶液。-20℃保存DNA。

      注意：1）洗脫液的pH值對于洗脫效率有很大影響。若用水做洗脫液，應保證其pH值在7.0-8.5之間（可以用NaOH將水的pH值調到此范圍）。

   2）為了提高DNA的回收量，可將離心得到的溶液重新滴加到吸附柱中，重復步驟6。

   3）洗脫體積不應小于50μl，體積過少會影響回收效率。

    4）如果使用TE洗脫，需要考慮其中含有的EDTA是否會影響后續的酶促反應。

    5）回收大于10kb的DNA片段時，BufferEB應在50℃水浴中預熱，適當延長吸附和洗脫時間，可增加回收效率。