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人類基因組miRNA靶標表達克隆的特點

通過螢火蟲熒光素酶的活性分析，可獲得miRNA對潛在靶標基因調控作用的結果。表達克隆轉錄后形成螢火蟲熒光素酶ORF與3’UTR的嵌合體mRNA，如果有特異的miRNA可與3’－UTR某段序列互補結合，嵌合體中熒光素酶ORF所編碼蛋白的活性也相應受到調控， 因此通過檢測熒光素酶的發光強度就可以定量地測定miRNA對應靶標的mRNA調控的效果。

miRNA 前體和靶標表達克隆的應用

• 基因表達調控：通過轉染或病毒顆粒感染的方式將單個或整套的miRNA導入培養細胞，進行單個miRNA或多個miRNA對基因的表達調控。對miRNA的調控效應和功能進行特定條件或體統化的研究
• miRNA靶標基因的確認和鑒定：利用miRNA靶標驗證表達克隆，進行大規模的miRNA作用靶標基因的篩選和確證。一個miRNA可作用的所有靶標的基因，和可作用于一個mRNA的3’－UTR所有miRNA