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OmicsLink™ shRNA表達克隆原理

圖2. shRNA導致基因表達抑制的機制

OmicsLink™ shRNA表達克隆的特性    

• 所有shRNA靶點序列的選取均經過準確算法計算。根據基因的不同， shRNA其莖的長度在19到29堿基對之間。這些保證shRNA克隆表達后有很高的表達抑制效率和zui低的脫靶效應（off target effect）。
• 克隆shRNA 所采用的載體有慢病毒載體和以哺乳動物細胞為宿主的載體，各類載體擁有不同的啟動子和跟蹤標記基因可供選擇。
• 載體中所帶有的綠色熒光跟蹤標記基因（ eGFP ）可以用于監測質粒載體的轉染效率和轉導病毒的感染效率。
• 載體結構上帶有穩定細胞株的篩選標記（嘌呤霉素）和綠色熒光跟蹤標記基因（EGFP ），這些特性使得該載體既能用于穩定抑制效應的研究，也可用于瞬時抑制效應的研究。
• 使用慢病毒載體系統，可轉導shRNA進入常規的分裂細胞，以及不分裂而難以轉染的目的細胞株。
• 載體的各部分序列已經過測序，包括啟動子、編碼shRNA的正義和反義鏈、發夾結構、終止子和其他接頭序列。

OmicsLink™ 的應用    

• 基因表達下調 shRNA克隆對單個基因的基因表達抑制效應可以通過和一個包含不規則序列的陰性對照克隆來比較研究。
• 信號通路研究 我公司的人類基因ORF克隆按照不同的信號傳導、代謝、疾病通路和相關性、基因家族等進行了分類。將已知同一通路的shRNA克隆以96孔或384孔板的形式排列在一起，可一次研究一組基因在某一信號通路中的功能。目前我公司已可提供針對人類全部激酶基因的shRNA克隆，并已按照按不同激酶的功能進行了分類。
• ORF表達克隆確證 我公司已有shRNA相應人類靶基因的ORF克隆，可裝在各種表達載體中，帶有不同的標簽和跟蹤標記基因。這些正常的ORF表達克隆和在shRNA靶序列帶有沉默突變的同樣的ORF表達克隆，可以用于shRNA確認研究和基因功能拯救研究。

產品保證

的表達框已經全長測序，包括啟動子、正義和反義靶序列、發夾結構、終止信號及其他接頭序列。 對于構建到psi-sH1載體中的人類激酶組shRNA克隆，我們每個基因提供1~3個克隆，所有克隆均已通過AP色度法確證其對靶基因的表達抑制水平達到70％以上。對于構建到慢病毒和哺乳動物載體的shRNA克隆，我們每個基因提供4個克隆。我們保證至少有1個克隆達到在mRNA水平對靶基因的表達抑制水平達到70%以上，前提是用前面所提的檢測方法，并嚴格按照說明書所提供的操作流程和注意事項進行實驗。如果經過我公司核實，的確4個中沒有1個有所期望的表達抑制水平的話，我公司承諾免費更換1-4個shRNA克隆。