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環狀沉淀反應

2012-8-4  閱讀(1360)

以炭疽環狀沉淀反應為例,此反應又稱Ascoli氏反應。
(一)材料與試劑
1.已知炭疽沉淀血清,購買自生物制品所。
2.待測炭疽沉淀抗原
3.試管5mm×50mm、滴管
4.0.3%石炭酸生理鹽水
(二)操作方法
1.待測抗原的提取
(1)取可疑為炭疽而死的病畜的實質臟器1g,放入試管或小三角燒瓶中,加生理鹽水5ml~10ml,煮沸30min~40min,冷卻后用濾紙過濾得清澈的液體,即為待測抗原。
(2)如病料是皮張,可采用冷浸法。將樣品高壓滅活后,剪成小塊并稱重,加約5倍的0.5%生理鹽水,室溫浸泡18h~24小時,濾紙過濾,即為待檢抗原。
2.取試管5支(5mm×50mm)置于試管架上,編號。第1、2試管內加炭疽沉淀血清,第3、4試管內加正常血清,第5管內加待檢抗原,分別用毛細滴管加至4mm~5mm。
3.第1、4、5試管輕輕疊加等量緩沖液,第2、3試管輕輕疊加等量待檢抗原。為防止上下兩界面破壞,可將小試管從試管架取出,微傾斜,沿試管壁加入緩沖液或抗原。
4.在試管架上靜置數分鐘,觀察結果。
(三)結果判定
第2管內兩液界面出現白色環狀沉淀帶,其余管無此種沉淀帶判為陽性。
(四)注意事項
1.反應物必須清澈,如不清澈,可離心,取上清液或冷藏后使脂類物質上浮,用吸管吸取底層的液體。
2.必須進行對照觀察,以免出現假陽性。
3.采用環狀沉淀反應,用以沉淀素效價滴定時,可將抗原做100×,1 000×,2 000×,4 000×,8 000×等稀釋,分別疊加于抗血清上,以出現環狀沉淀的zui大稀釋倍數,即為該血清的沉淀素效價。



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