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上海源葉生物科技有限公司
主營產(chǎn)品： S30260異硫氰酸胍,30259鹽酸胍,嗜熱菌蛋白酶 |
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感受態(tài)細(xì)胞的轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)流程
2012-7-7 閱讀(1312)
1. 取 100μl 感受態(tài)細(xì)胞于冰浴上融化。
2. 加入 1μl 純質(zhì)粒或連接產(chǎn)物，輕輕吹打混勻，冰浴 30 min。
3. 將菌液放入 42℃水浴中熱激 90 秒，立即放入冰浴中 2 min。
4. 加入 0.9ml SOC，于 37℃恒溫?fù)u床上 200rpm×1hr 溫育。
5. 將菌液 4000rpm/min 離心 3min，留 200μ l 上清將菌體打散，均勻涂布于含適當(dāng) 抗生素的瓊脂平板表面，平板于 37℃倒置培養(yǎng)過夜。
注：
① 新倒的平板可于 37℃培養(yǎng)箱中預(yù)先放置數(shù)小時(shí)至過夜干燥。
② 當(dāng)轉(zhuǎn)化的是 TA 克隆連接產(chǎn)物時(shí)可在菌液中加入 8μl 1M IPTG 和 40μl 20mg/ml X -gal 以進(jìn)行藍(lán)白斑篩選。
