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上海源葉生物科技有限公司
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現(xiàn)場或牧區(qū)大群檢疫布氏桿菌病的免疫學(xué)方法
2011-5-25 閱讀(753)
1．虎紅平板凝集試驗（RBT）
虎紅平板凝集試驗是血清凝集試驗（SAT）中較常用的一種方法。我國于1980年開始應(yīng)用，目前應(yīng)用廣泛。其抗原為虎紅染色抗原。將每份血清樣品取25～30uL放在白搪瓷板、塑料板或WHO血凝反應(yīng)板上，在每份血清滴的旁邊加等量抗原，在zui后一滴抗原加上以后立即混合血清和抗原，使其形成直徑約2cra的區(qū)域，室溫下輕微搖晃4min，凡出現(xiàn)可見凝集反應(yīng)者均判為陽性，反之判為陰性。
RBT試驗敏感，然而，與其他血清學(xué)試驗一樣，由于S19疫苗免疫或假陽性反應(yīng)（FPSR）而出現(xiàn)陽性結(jié)果。假陰性反應(yīng)較少發(fā)生（主要是因為前帶反應(yīng)），對血清樣品進行稀釋或一定時間后重復(fù)檢測可消除這種反應(yīng)。RBT試驗可以作為感染畜群的篩查實驗，陽性反應(yīng)應(yīng)用合適的確證體系進行復(fù)查（包括其他試驗檢驗和流行病學(xué)調(diào)查）。
2．緩沖布氏桿菌平板凝集試驗（BPAT）
取血清80ul與30ul的抗原在玻板上標出的4cm×4cm的范圍內(nèi)混合均勻，接著將板傾斜旋轉(zhuǎn)3次，以使二者均勻散開，然后將板置常溫下（20～25℃）濕盒內(nèi)孵育4min。再取出如前述旋轉(zhuǎn)3次再孵育4min。取出玻板，邊轉(zhuǎn)邊觀察凝集情況。任何可見的凝集均判為陽性。與虎紅平板凝集試驗一樣，此法也很敏感，尤其是對免疫過的動物。陽性樣品需用驗證實驗進行復(fù)查。假陰性的出現(xiàn)通常是由于前帶反應(yīng)，通過對血清進行稀釋或一定時間后復(fù)查可消除這種影響。
3．布氏桿菌病全榛紛詞匝?
抗原由獸醫(yī)生物藥廠供應(yīng)。受檢乳樣須為新鮮的全乳，采乳樣時應(yīng)將母畜的乳房用溫水洗凈、擦干，然后將乳液擠入潔凈的器皿中，采集的乳樣夏季時應(yīng)于當日內(nèi)檢查，保存于2℃時，7天內(nèi)可使用。取乳樣lml，加于滅菌凝集試驗管內(nèi)，然后取充分振蕩混合均勻的全乳環(huán)狀抗原1滴（約50pL）加入乳樣中充分混勻。置37-38℃水浴中60min，加溫后取出試管勿使之振蕩，立即進行判定。按乳脂和乳柱的顏色進行判定，脂肪較少或無脂肪的牛乳呈陽性反應(yīng)時，菌體呈凝集現(xiàn)象下沉管底，判定時以乳柱的反應(yīng)為準。
