對于該病的實驗室診斷，傳統的方法是進行病毒分離，然后用血凝和血凝抑制進行鑒定。盡管NDV只有一種血清型，但是不同毒株間的毒力差異很大。加上近年來新城疫弱毒活疫苗的廣泛應用，僅從具有臨床癥狀的病禽分離出病毒進行鑒定，還不能對ND作出確診，因此需要對分離株的致病性進行評估，OIE根據*的病原毒力與病原分子結構間的關系建立的體外毒力鑒定技術，已經用于世界范圍內新城疫病毒的調查。世界動物衛生組織（OIE）對報告ND暴發作丁下述定義：ND是由血清1型禽副黏病毒（APMV-1）引起的禽類感染，該APMV—1在毒力上符合下列兩個標準中的一個：

①該病毒在1日齡雛雞的腦內接種致病指數（1CPl）大于0.7；
②該病毒P1蛋白的N端（即117位殘基）為苯丙氨酸（F），而F2蛋白的C端有多個堿性氨基酸（直接測序或從核苷酸序列推導）。所謂多個堿性氨基酸是指在113位和116位之間至少有3個精氨酸或賴氨酸殘基。不能顯示上述氨基酸殘基的特征結構則需要對分離的病毒作ICPl試驗。

根據OIE對NDV的這一定義，目前OIE確診ND有兩種方法：
一是分離鑒定NDV并進行生物學試驗，測定分離NDV的MDT、ICPt和IVPI以確定其毒力；
二是采用基于RT-PCR的分子生物學方法，確定病原為NDV并確定其毒力。

因常規的病毒分離鑒定和用生物學試驗確定毒力費時、費力、費錢，又要使用動物，已越來越不被人們所接受。在這種情況下，經過幾年探索而日趨成熟的分子確診方法，可以用來取代常規的確診方法。近年來，隨著分子生物學和免疫學技術的快速發展，越來越多的快速診斷方法在新城疫的檢測方面得到廣泛的應用，如RT-PCR技術、熒光RT-PCR技術、EIASA技術和膠體金標記的診斷技術等。