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上海起發(fā)實(shí)驗(yàn)試劑有限公司
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PEI轉(zhuǎn)染手冊(cè)
轉(zhuǎn)染操作流程：
1、細(xì)胞傳代：
轉(zhuǎn)染前24h內(nèi)分離293T細(xì)胞至含10％胎牛血清的DMEM培養(yǎng)基 中進(jìn)行傳代培養(yǎng)，接種密度如下：
6孔板：0.5x106細(xì)胞
10cm培養(yǎng)皿：4.0x106細(xì)胞
15cm培養(yǎng)皿：9.0x106細(xì)胞
2、轉(zhuǎn)染
轉(zhuǎn)染前將所有試劑置于室溫。
2.1質(zhì)粒DNA的稀釋
在無菌試管中，用無血清的DMEM W / O酚紅培養(yǎng)基（濃度為10％）稀釋質(zhì)粒DNA（ug）。病毒包裝體（psPAX2）：病毒包膜（pMD2G）和重組質(zhì)粒DNA的稀釋比例分別為4:2:1。
6孔板：200ul+3ug的DNA
10cm培養(yǎng)皿：1ml+7-8ug的DNA
15cm培養(yǎng)皿：2ml+11-12ug的DNA
2.2 轉(zhuǎn)染復(fù)合體形成
將PEI（1ug/uL）加入已稀釋的總DNA中，PEI與DNA（ug）的混合比率為3:1。加入后立即渦旋混合。
6孔板：9ul PEI復(fù)合體（1ug/ul）=9ug
10cm培養(yǎng)皿：21ul PEI復(fù)合體（1ug/ul）=21ug
15cm培養(yǎng)皿：33ul PEI復(fù)合體（1ug/ul）=33ug
將添加到細(xì)胞的DNA/ PEI的混合物在室溫下孵育15分鐘。
4、收獲轉(zhuǎn)染細(xì)胞
轉(zhuǎn)染后48小時(shí)內(nèi)收獲轉(zhuǎn)染細(xì)胞/或病毒上清。
試劑的配制：
PEI（1ug/ul） Polysciences（CAT＃23966-2配制成儲(chǔ)液：)
1、將無內(nèi)毒素的無菌水加熱至80℃左右溶解PEI，冷卻到室溫。
2、調(diào)整pH值至7.0，用0.22um的濾器過濾消毒，分裝后儲(chǔ)存在-20℃。工作液可保持在4℃
訂貨信息
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友情提醒：
Polyethylenimine, Linear (MW 25,000) 23966-2為Polysciences公司生產(chǎn)的化合物產(chǎn)品，每批產(chǎn)品出廠前都經(jīng)過嚴(yán)格的檢測(cè),保證每批產(chǎn)品都*、穩(wěn)定且高品質(zhì),但由于作為轉(zhuǎn)染試劑使用過程中有很多實(shí)驗(yàn)室因素(PH,水純度,稱量的準(zhǔn)度,dna純度…)造成溶解出現(xiàn)問題或者轉(zhuǎn)染效率出現(xiàn)差異,所以廠家只受理該產(chǎn)品純度，分子量及重量缺失破損等相關(guān)投訴，針對(duì)極個(gè)別客戶溶解問題和轉(zhuǎn)染效率問題我們只能友善解決,所以不能保證您能獲得滿意答復(fù)，對(duì)于產(chǎn)品應(yīng)用方法的問題，不作為評(píng)價(jià)我們售后工作的依據(jù)。
如果我們提供的PEI手冊(cè)都無法解答您的問題,建議您可以多看文獻(xiàn),多調(diào)整一下轉(zhuǎn)染條件,找出適合自己細(xì)胞的轉(zhuǎn)染方法。如果無暇摸索條件,您也可以直接購買我們EZ Trans細(xì)胞轉(zhuǎn)染液,這樣免去您很多煩惱,謝謝理解
Polysciences 23966-2 Polyethylenimine, Linear (MW 25,000) 大量現(xiàn)貨，*
我們公司zui大優(yōu)勢(shì)是強(qiáng)大的采購，
1：基本什么都能進(jìn)口，血清，抗體，耗材，還有部分限制進(jìn)口的，
2：貨品全，現(xiàn)經(jīng)營(yíng)過700多個(gè)品牌，基本所有生物試劑耗材都可以進(jìn)口，特別是冷偏的產(chǎn)品那就更有優(yōu)勢(shì)，
3：提供加急服務(wù)，一般1-2周到貨，超過時(shí)限加急費(fèi)全免
4：價(jià)格公道，絕大部分價(jià)格有優(yōu)勢(shì)，當(dāng)然不能保證100%產(chǎn)品都是,因?yàn)橐馕吨鴽]有服務(wù).
5：良好的信譽(yù)，大部分客戶我們提供貨到付款服務(wù)，客戶包括清華，北大 交大 復(fù)旦，中山等100多所大學(xué)，ROCHE，阿斯利康，國(guó)藥 ，fisher等500多家公司
6：我們*代理的品牌有：Antibody Research Corporation，arcticzymes，Biorelevant，chiralix，clemente-associates，clodronaiposomes，Columbia Biosciences，enzyme research，Gene Bridges GmbH，Genovis，Glycotope Biotechnology GmbH，Haematologic Technologies HTI Haemtech，hookelabs，Immudex，Innovative Research of America，inspiralis ，List Biological Laboratories, Inc.，lumafluor，Microsurfaces，multiplicom，nanotools，Pel-Freez Biologicals，pentapharm，progen，Protein Ark，QA-Bio,Inc，QA-Bio,IncQuickZyme Biosciences，Teknova，TriLink BioTechnologies, Inc.，Zyagen Laboratories 等
