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什么是LB培養基,以及LB培養基的分類

閱讀:21834      發布時間:2016-5-23
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 什么是LB培養基?LB培養基是一種培養基的名稱,是微生物學實驗中常用的培養基,生化分子實驗中一般用該培養基來預培養菌種,使菌種成倍擴增,達到使用要求.可分為液體培養基和固體培養基。
LB培養基的分類
      液態LB培養基
      根據《分子克隆實驗指南》(J.薩姆布魯克D.W.拉塞爾著)配制每升培養基,應該在950 ml去離子水中加入:
      蛋白胨    10g
      酵母提取物    5g
      NaCl     10g
      搖動容器直溶質溶解.用5mol/LNaOH調pH7.0.用去離子水定容1L.在15psi高壓下蒸汽滅菌21min.
      培養的菌種一般是經過改造的無法在外界環境單獨存活和擴增的工程菌.通過培養工程菌,我們可以表達大量的外源蛋白,也可以拿到帶有外源基因的質粒,工程菌的有效擴增是生化分子實驗的基礎.
      LB培養基的配方如下:
      胰蛋白胨(Tryptone) 10g/L
      酵母提取物(Yeast extract) 5g/L
      氯化鈉(NaCl) 10g/L
      另外根據經驗值用NaOH調節該培養基的pH,使其達到7.4(該pH適合目前使用廣的原核表達菌種E.coli的生長)
      固態LB培養基
      LB固體培養基1L和液體一樣,加10g~15g瓊脂粉,一定要在溫度降下之前加好抗生素,并且倒好板。
      LB培養基的配制:
      成分
      胰蛋白胨(tryptone)        10g
      酵母提取物(yeast extract)        5g
      氯化鈉(NaCl)       10g
      固體培養基另加 瓊脂粉        15-20g
      加雙蒸水1000mL, 用5mol/L NaOH(約0.2ml)調pH7.2,121℃滅菌30min
      配制方法
      (1)稱量 分別稱取所需量的胰化蛋白胨、酵母提取物和NaCl,置于燒杯中。
      (2)溶化 加入所需水量2/3的蒸餾水于燒杯中,用玻棒攪拌,使藥品全部溶化。
      (3)調pH 用1mol/L NaOH溶液調pH7.2。
      (4)定容 將溶液倒入量筒中,加水所需體積。
      (5)加瓊脂 加入所需量瓊脂,加熱融化,補足失水。
      (6)分裝、加塞、包扎。
      (7)高壓蒸汽滅菌100Pa滅菌20min。

      以上便是LB培養基的簡單介紹以及分類和配制方法。LB培養基由蛋白胨、酵母膏、nacl組成。先,蛋白胨是經過胰酶處理過的蛋白,處理后,大分子的蛋白分子量變小,細菌更容易利用。此外,還含有嘌呤,提供生長因子。如要培養大腸桿菌,其實用普通蛋白胨代替胰蛋白胨是沒有問題的。

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