S100B蛋白酶免ELISA試劑盒

時間：2011/11/17閱讀：1412

S100B蛋白酶免ELISA試劑盒

德國DRG*，貨號：EIA5169

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預(yù)期用途

此試劑盒用于人血清和血漿中S100B濃度的檢測，僅用于實驗室

實驗原理

此試劑盒基于兩抗體與S100B結(jié)合，一個抗體固定在包被板上，另外一個則被HRP標(biāo)記。試驗基于兩步法，每次洗板后，結(jié)合的和游離的就會分離，底物液TMB加入，會發(fā)生顏色變化，終止液加入終止反應(yīng)，吸收值檢測。樣品中的S100B的濃度計算可從標(biāo)準(zhǔn)品著手。顏色強度與樣品中的S100B的濃度成正比

試劑盒組成

1. S100B標(biāo)準(zhǔn)品，6支，凍干粉，STD0-STD5

2. 質(zhì)控品，2支，凍干粉，陰性質(zhì)控和陽性質(zhì)控

3. 酶聯(lián)物緩沖液，1支，20ml，Tris緩沖液，BSA10g/L,0.05%吐溫

4. 酶聯(lián)物，1支，1ml，HRP標(biāo)記的抗S100B

5. 試驗緩沖液，1支，12ml，Tris緩沖液，BSA10g/L，穩(wěn)定劑

6. 包被板，可拆，包被有抗S100B

7. TMB底物液，1支，15ml，H₂O₂-TMB 0.25g/L，避免皮膚接觸

8. 終止液，1支，15ml，0.15mol/L硫酸，避免皮膚接觸

9. 洗滌濃縮液，50X，1支，20ml，NaCl 45g/L,吐溫20 55g/L

實驗所需但試劑盒未提供

1. 去離子水

2. 自動移液器

3. 酶標(biāo)儀

注意：所有試劑應(yīng)保存在黑暗處2-8℃，微孔板平衡至室溫方可打開包裝，使用完后立即密封，不要移去未用板條的粘合條

注意事項

1. 試劑內(nèi)含有硫柳汞防腐劑

2. 配制和吸取試劑時應(yīng)按zui高度要求操作

3. 所有試劑都有各自的批號，不要混用不同批次內(nèi)的物質(zhì)

4. S100B的檢測范圍為10-5000pg/ml

5. 標(biāo)準(zhǔn)品的具體濃度見瓶上標(biāo)簽

6. 不要使用嚴(yán)重溶血樣品

7. 避免底物液暴露在陽光，金屬或氧化劑下

操作步驟

樣品準(zhǔn)備

S100B檢測可使用人血清或血漿，不要使用溶血樣品，樣品可在2-8℃下保存1天，更長的保質(zhì)期的話可放置在-20℃，避免反復(fù)凍融，不要將樣品放置在室溫下的時間過長，樣品濃度高于5ng/ml時，應(yīng)用試驗緩沖液進(jìn)一步稀釋

標(biāo)準(zhǔn)品和質(zhì)控品的準(zhǔn)備

用1ml的去離子水配制標(biāo)準(zhǔn)品和質(zhì)控品，可保存于2-8℃下4周，-20℃6個月，建議分裝保存于-20℃。標(biāo)準(zhǔn)品濃度見標(biāo)簽。避免反復(fù)凍融和長時間暴露在室溫下

酶聯(lián)物的準(zhǔn)備

使用前2小時準(zhǔn)備

50ul的酶聯(lián)物+1.0ml的酶聯(lián)緩沖液（稀釋的酶聯(lián)物的量與試驗樣本量成正比），混合5min，避免氣泡產(chǎn)生，室溫下（22-28℃）可保存3小時

洗滌液準(zhǔn)備

10ml的洗滌濃縮液+490ml的去離子水；不同的體積但保持同一稀釋比例；室溫下（22-28℃）可保存至標(biāo)簽上所示的有效期

實驗步驟

建議做雙份檢測，包括標(biāo)準(zhǔn)品，質(zhì)控品和樣品，還有一個空白對照孔

試劑	標(biāo)準(zhǔn)品	樣品/質(zhì)控	空白對照
標(biāo)準(zhǔn)品S0-S5 質(zhì)控	50ul
樣品/質(zhì)控		50ul
試驗緩沖液	50ul	50ul
室溫下孵育2小時，棄去孵育液，每孔加300ul的洗滌液洗板6次
稀釋的酶聯(lián)物	100ul	100ul
室溫下孵育1小時，棄去孵育液，每孔加300ul的洗滌液洗板6次
TMB底物液	100ul	100ul	100ul
黑暗處，室溫下孵育30min
終止液	100ul	100ul	100ul
輕輕搖動微孔板，酶標(biāo)儀上讀數(shù)（450nm）