德國IBL 肺炎支原體IgM ELISA試劑盒

時間：2011/10/27閱讀：2175

德國IBL肺炎支原體IgM ELISA試劑盒

（貨號：RE56681）

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1、應用范圍

此ELISA試劑盒可用于人血清中抗肺炎支原體IgM抗體的體外定性和定量檢測。

2、前言說明

除病毒、冠狀病毒、流感病毒、副流感病毒或腺病毒外，肺炎支原體也是傳統感冒的致病因子。支原體屬于柔膜體綱。其六個真菌屬的共有特征是沒有細菌細胞避，滲透能力差，體積小。與革蘭氏陽性和革蘭氏陰性菌相比，其基因組明顯更小。它們依靠宿主細胞而生長，個別如寄生蟲一樣依靠宿主有機體而生長。肺炎支原體是一種引起氣管支氣管炎和原發性非典型肺炎的致病菌。肺炎支原體感染通常可伴隨有續發性疾病，如梗塞、腦炎、慢性神經病和格林-巴利綜合征（GBS）。在實驗室內，除冷凝集實驗和補體結合實驗外，ELISA是一種靈敏度較高而且可區分不同免疫球蛋白的可選方法。在急性感染中，特異性IgA抗體比IgM產生得更有規律、更快。IgA濃度減少的時間比IgM要早，或是說比后來的IgG增加反應要早。各種各樣的研究都表明，肺炎支原體三種免疫球蛋白的檢測對監測其臨床發展進程是非常有必要的。

3、實驗原理

此固相ELISA試劑盒利用的是夾心法。包被孔內包被了抗原，用對人IgM有特異性的酶標抗體來檢測樣品中的特異性抗體（此抗體可結合到包被抗原上）。底物反應后，所顯示的顏色的強度與檢測到的IgM特異性抗體的量正比。樣品的結果可直接用標準曲線獲得。

4、試劑盒組成：

4×2ml	標準品A-D	1；10；35；125U/mL，待用標準品A=陰性質控標準品B=臨界質控標準品C=弱陽性質控標準品D=陽性質控內含抗支原體的IgM抗體，PBS（磷酸緩沖液），穩定劑。
1×14ml	酶標IgM	紅色，待用。內含過氧酶標記的抗人IgM，蛋白緩沖液，穩定劑。
1×12×8	包被板	可拆，包被有特異性抗原。
1×14ml	TMB底物液	含TMB
1×14ml	TMB終止液	0.5M的H₂SO₄
1×60ml	稀釋液	含PBS緩沖液，＜0.1%NaN₃
1×60ml	濃縮洗滌液	濃縮型（10×），含PBS緩沖液，吐溫20
2×	粘性金屬板	用于在溫育時遮蓋包被板
1×	塑料袋	用于儲存不用的板條

5、實驗所需材料但試劑盒不提供

1） RF吸附劑

2）移液器，體積：5；50；100；500 µL

3）校準儀

4）樣品稀釋用試管（1ml）

5）帶試劑儲器8道移液器

6）洗滌瓶，自動或半自動洗板機

7）能在450nm處讀數的酶標儀

8）雙蒸水或去離子水

9）吸水紙，取樣吸頭和計時器

6、實驗前的準備說明

6.1成分準備

稀釋/溶解	成分		稀釋液	比例	備注	貯存	穩定性
60ml	洗滌液	加600ml	雙蒸水	1：10	加熱至37°C以溶解結晶，充分混合	2-8°C	8周

6.2樣品稀釋

樣品	稀釋	稀釋液	比例	備注
血清/血漿	全部稀釋	稀釋緩沖液	1：101	例：5µL+500µL

6.3用RF吸附劑處理：

注意	為了避免特異性IgG和類風濕因子的干擾，病人的血清應當用RF吸附劑處理（RE59059）。標準品和質控品千萬不要用RF吸附劑處理。
1.	在400µL按1：101的比例稀釋的樣品中加入20µL RF吸附劑。充分混合。
2.	室溫（18-25℃）下溫育≥1min（＜15min）

為了避免吸附特異性抗體，應當避免溫育時間＞15min。

預處理的樣品可能會是渾濁的。

7、實驗步驟：

1）加100µL標準品和已稀釋樣本于相應反應孔中，在定性檢測中只使用標準品B。

2）封板后室溫（18℃-25℃）溫育60分鐘。

3）移去粘性金屬板，棄去孔中液體。用300µL洗滌液洗板3次，在吸水紙上拍干。

4）在每一微孔中加入100µL酶聯物。

5）封板后室溫（18℃-25℃）溫育30分鐘。

6）移去粘性金屬板，棄去孔中液體。用300µL洗滌液洗板3次，在吸水紙上拍干。加底物液和終止液時，如果有條件的話，可使用8孔微量移液器。確保底物液和終止液都是相同的時間間隔加入。使用確切容積并避免氣泡產生。

7）每孔加TMB底物液100µL。

8）室溫（18℃-25℃）避光溫育20分鐘。

9）在每一微孔中加入100µLTMB終止液以終止底物反應。輕輕搖動包被板以使試劑混合均勻。此時，顏色藍色變成黃色。

10）加終止液后60分鐘內在450nm（參考波長：600-650nm）處測OD值。

8、結果計算

在半對數坐標紙上或用自動生成的方法，以標準品的OD值為Y軸，濃度為X軸，繪制一標準曲線圖。用立體圖、4參數對數圖或對數-對數圖都可獲得良好的實驗結果。對于標準曲線圖，用標準品的每一單值進行計算（樣品結果明顯異常的值必須刪除掉，應使用更加合理的單值）。樣品的濃度可直接從標準曲線上獲得。一旦樣品稀釋了，就應當乘以相應的稀釋因子。如果樣品所測得的濃度高于zui高標準，則應根據實驗前的準備說明所述對樣品進行稀釋，并重新檢測。

9、結果判定：

＞ 12 U/ml 為陽性

8 - 12 U/ml 為可疑

＜ 8 U/ml 為陰性

此檢測結果并不是任何治療結果判定的*因素，它應當結合臨床觀察和診斷結果加以判斷。

本譯文僅供參考，詳情請以原文為準。

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