国产一级a毛一级a看免费视频,久久久久久国产一级AV片,免费一级做a爰片久久毛片潮,国产精品女人精品久久久天天,99久久久无码国产精品免费了

上海聯碩生物科技有限公司
中級會員 | 第17年

13917838824

脂質體轉染法的原理和操作步驟

時間:2025/5/9閱讀:100
分享:

一般來說細胞轉染的方法主要包括:電穿孔法、顯微注射、基因槍、磷酸鈣共沉淀法、脂質體轉染法、多種陽離子物質介導、病毒介導的轉染等。

01

脂質體的轉染方法原理

脂質體作為體內和體外輸送載體的工具,已經研究的十分廣泛,用合成的陽離子脂類包裹 DNA,同樣可以通過融合而進入細胞。

使用脂質體將 DNA 帶入不同類型的真核細胞,與其它方法相比,有較高的效率和較好的重復性。

中性脂質體是利用脂質膜包裹 DNA,借助脂質膜將 DNA 導入細胞膜內。

帶正電的陽離子脂質體,DNA 并沒有預先包埋在脂質體中,而是帶負電的 DNA 自動結合到帶正電的脂質體上,形成 DNA-陽離子脂質體復合物,從而吸附到帶負電的細胞膜表面,經過內吞被導入細胞。

02

脂質體轉染的操作步驟

操作步驟:

(1) 細胞培養:取 6 孔培養板 (或用 35 mm 培養皿),向每孔中加入 2 mL 含 1~2×105 個細胞培養液,37℃ CO2 培養至 40%~60% 匯合時 (匯合過分,轉染后不利篩選細胞)。

(2) 轉染液制備:在聚苯乙/烯管中制備以下兩液 (為轉染每一個孔細胞所用的量)A 液:用不含血清培養基稀釋 1-10 μg DNA,終量 100μL,B 液:用不含血清培養基稀釋 2-50 μgLR,終量 100μL,輕輕混合 A、B 液,室溫中置 10-15 分鐘,稍后會出現微濁現象,但并不妨礙轉染 (如出現沉淀可能因 LR 或 DNA 濃度過高所致,應酌情減量)。

(3) 轉染準備:用 2 mL 不含血清培養液漂洗兩次,再加入 1 mL 不含血清培養液。

(4) 轉染:把 A/B 復合物緩緩加入培養液中,搖勻,37℃ 溫箱置 6~24 小時,吸除無血清轉染液,換入正常培養液繼續培養。

(5) 其余處理如觀察、篩選、檢測等與其它轉染法相同。

注意:轉染時切勿加血清,血清對轉染效率有很大影響。


會員登錄

×

請輸入賬號

請輸入密碼

=

請輸驗證碼

收藏該商鋪

X
該信息已收藏!
標簽:
保存成功

(空格分隔,最多3個,單個標簽最多10個字符)

常用:

提示

X
您的留言已提交成功!我們將在第一時間回復您~
撥打電話
在線留言
主站蜘蛛池模板: 翁源县| 汶上县| 新邵县| 镇巴县| 卢氏县| 齐齐哈尔市| 信宜市| 阿拉尔市| 石首市| 综艺| 察雅县| 金溪县| 宝清县| 新丰县| 连城县| 彰化市| 运城市| 固阳县| 昂仁县| 阿尔山市| 武功县| 栾川县| 泸溪县| 措美县| 南昌县| 托克托县| 天津市| 赤水市| 山东省| 花莲县| 当涂县| 葵青区| 江油市| 石泉县| 卢氏县| 铜山县| 福建省| 保康县| 焉耆| 嵊州市| 绿春县|