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GoldView(GV)核算染料之技術說明

時間:2009/12/17閱讀:3990
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GoldView™是一種可代替溴化乙錠(EB)的新型核酸染料,采用瓊脂糖電泳檢測DNA時,GoldView™與核酸結合后能產生很強的熒光信號,其靈敏度與EB相當,使用方法與之*相同。在紫外透射光下雙鏈DNA呈現綠色熒光,而且也可用于染RNA。
  通過Ames試驗、小鼠骨髓嗜多染紅細胞微核試驗、小鼠睪丸精母細胞染色體畸變試驗,致突變性結果均為陰性;而溴化乙錠(EB)是一種強致癌劑。因此用Goldview™代替EB不失為一種明智的選擇。
  使用方法
  1. 將100ml瓊脂糖凝膠溶液(濃度一般為0.8%~2%)在微波爐中融化。
  2. 加入5µl GoldView,輕輕搖勻,避免產生氣泡。
  3. 冷卻至不燙手時倒膠,待瓊脂糖凝膠*凝固后上樣電泳。
  4. 電泳完畢在紫外燈下觀察。若使用數碼相機照相記錄,則關閉相機的閃光燈,放在自動檔即可;若使用凝膠成像系統照相,通過調節光圈、曝光時間,選擇合適的濾光片,可得到成像清晰、背景較低的照片。
  注意事項
  1. 膠厚度不宜超過0.5cm,膠太厚會影響檢測的靈敏度。
  2. 加入GoldView的瓊脂糖凝膠反復融化可能會對核酸檢測的靈敏度產生一定影響,但不明顯。
  3. 通過凝膠電泳回收DNA片段時,建議使用GoldView染色,在自然光下切割DNA條帶,避免紫外線與EB對目的DNA產生的損傷,可明顯提高克隆、轉化、轉錄等分子生物學下游操作的效率。
  4. 雖然未發現GoldView有致癌作用,但對皮膚、眼睛會有一定的刺激,操作時應戴上手套。

 

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