BG6010 天冬酰an合成酶活性測(cè)定試劑盒 氮代謝系列
- 公司名稱 北京諾博萊德科技有限公司
- 品牌 NobleRyder/諾博萊德
- 型號(hào) BG6010
- 產(chǎn)地
- 廠商性質(zhì) 經(jīng)銷商
- 更新時(shí)間 2025/4/8 17:54:25
- 訪問(wèn)次數(shù) 125
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| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 100T/96S |
|---|---|---|---|
| 貨號(hào) | BG6010 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)林牧漁,制藥/生物制藥 |
| 主要用途 | 天冬酰an合成酶活性測(cè)定試劑盒 |
天冬酰an合成酶(asparagine synthetase，AS) 活性測(cè)定試劑盒說(shuō)明書(shū)
微量法 100 管/96 樣
正式測(cè)定前務(wù)必取 2-3 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定測(cè)定意義：
天an酰胺合成酶是廣泛存在于生物體內(nèi)的一類氨基轉(zhuǎn)移酶，催化谷an酞胺的氨基向天冬氨酸轉(zhuǎn)移。當(dāng)植物處于氨毒時(shí)天an酞胺的形成是一種解毒反應(yīng)。
測(cè)定原理：
AS 催化L-天an酰胺水解成 L-天冬an酸和氨，利用奈氏試劑檢測(cè)氨增加的速率，即可計(jì)算其酶活性。
天冬酰an合成酶活性測(cè)定試劑盒 氮代謝系列
組成：
產(chǎn)品名稱 | BG6010-100T/96S | Storage |
試劑一：液體 | 60 ml | 4℃ |
試劑二：液體 | 40ml | 4℃ |
試劑三：液體 | 60 ml | 常溫 |
試劑四：液體 | 5 ml | 常溫 |
試劑五：液體 | 3 ml | 常溫 |
試劑六：液體 | 3 ml | 常溫避光 |
說(shuō)明書(shū) | 一份 | |
具體產(chǎn)品的參數(shù)以收到產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)的參數(shù)為準(zhǔn)
自備儀器和用品：
臺(tái)式離心機(jī)、可見(jiàn)分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96 孔板、可調(diào)式移液槍、研缽、冰和雙蒸水。
粗酶液提取：
1、細(xì)菌、細(xì)胞或組織樣品的制備：
細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞：先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量（104 個(gè)）：試劑一體積（ml）為 500~1000：1 的比例（建議 500 萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入 1ml 試劑一），超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞（冰浴，功率 20％或 200W，超聲 3s，間隔 10s，重復(fù) 30 次）；8000g 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測(cè)。
組織：按照組織質(zhì)量（g）：試劑一體積(ml)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織，加入 1ml 試劑一），進(jìn)行冰浴勻漿。8000g 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測(cè)。
2、血清（漿）樣品：直接檢測(cè)。
測(cè)定步驟：
1、分光光度計(jì)或酶標(biāo)儀預(yù)熱 30min 以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至 420nm，蒸餾水調(diào)零。
2、樣品測(cè)定（在 EP 管中加入下列試劑）：
試劑名稱（μl） | 測(cè)定管 | 對(duì)照管 |
樣本 | 25 | |
蒸餾水 | 25 | |
試劑一 | 100 | 100 |
試劑二 | 400 | 400 |
混勻，37℃水浴 1 小時(shí)
試劑三 | 525 | 525 |
混勻，8000 g，25℃離心 10 min；取上清液，在EP 管或 96 孔板中加入下列試劑
上清液 | 130 | 130 |
試劑四 | 30 | 30 |
試劑五 | 20 | 20 |
試劑六 | 20 | 20 |
混勻，室溫靜置 15min，420nm 處讀取測(cè)定管和對(duì)照管吸光值，計(jì)算ΔA=A 測(cè)定管-A 對(duì)照管。對(duì)照管只要做一管。
注意：試劑六如出現(xiàn)沉淀，靜置后取上清使用。
酶活性計(jì)算：
a. 用微量石英比色皿測(cè)定的計(jì)算公式如下
標(biāo)準(zhǔn)條件下測(cè)定的回歸方程為y = 0.662x -0.0434；x 為標(biāo)準(zhǔn)品濃度（μg/ml），y 為吸光值 A。 1、血清（漿）AS 活性
單位定義：每ml 血清（漿）每小時(shí)產(chǎn)生 1μg 氨定義為一個(gè)酶活力單位。
AS（μg/h/ml）＝(ΔA+0.0434) ÷0.662×V 反總÷V 樣÷T=31.722×(ΔA+0.0434)
2、組織、細(xì)菌或細(xì)胞中 AS 活力的計(jì)算:
（1） 按樣本蛋白濃度計(jì)算：
單位的定義：每mg 組織蛋白每小時(shí)產(chǎn)生 1μg 氨定義為一個(gè)酶活力單位。
AS 活力（μg/h/mg prot）＝(ΔA+0.0434) ÷0.662×V 反總÷(V 樣×Cpr)÷T =31.722×(ΔA+0.0434) ÷Cpr
（2） 按樣本鮮重計(jì)算：
單位的定義：每g 組織每小時(shí)產(chǎn)生 1μg 氨定義為一個(gè)酶活力單位。
AS 活力（μg/h/g 鮮重）＝(ΔA+0.0434) ÷0.662×V 反總÷(W× V 樣÷V 樣總)÷T =31.722×(ΔA +0.0434) ÷W
（3） 按細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算：
單位的定義：每 1 萬(wàn)個(gè)細(xì)菌或細(xì)胞每小時(shí)產(chǎn)生 1μg 氨定義為一個(gè)酶活力單位。
AS 活力（μg/h/104 cell）＝(ΔA+0.0434) ÷0.662×V 反總÷(500×V 樣÷V 樣總) ÷T=0.0634×(ΔA+0.0434)
T：反應(yīng)時(shí)間，1h； V 反總：反應(yīng)體系總體積：0.525ml；V 樣：加入反應(yīng)體系中樣本體積，0.025ml；V樣總：提取液體積，1ml；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/ml； W：樣本質(zhì)量， g；500：細(xì)菌或細(xì)胞總數(shù)， 500 萬(wàn)
b. 用 96 孔板測(cè)定的計(jì)算公式如下
標(biāo)準(zhǔn)條件下測(cè)定的回歸方程為y = 0.3046x -0.0097；x 為標(biāo)準(zhǔn)品濃度（μg/ml），y 為吸光值A。 1、血清（漿）AS 活力的計(jì)算:
單位的定義：每ml 血清（漿）每小時(shí)產(chǎn)生 1μg 氨定義為一個(gè)酶活力單位。
AS 活力（μg/h/ml）＝(ΔA +0.0097) ÷0.3046×V 反總÷V 樣÷T=68.94×(ΔA +0.0097)
2、組織、細(xì)菌或細(xì)胞中 AS 活力的計(jì)算:
（1） 按樣本蛋白濃度計(jì)算：
單位的定義：每mg 組織蛋白每小時(shí)產(chǎn)生 1μg 氨定義為一個(gè)酶活力單位。
AS 活力（μg/h/mg prot）＝(ΔA +0.0097) ÷0.3046×V 反總÷(V 樣×Cpr)÷T =68.94×(ΔA +0.0097) ÷Cpr
（2） 按樣本鮮重計(jì)算：
單位的定義：每g 組織每小時(shí)產(chǎn)生 1μg 氨定義為一個(gè)酶活力單位。
AS 活力（μg/h/g 鮮重）＝(ΔA +0.0097) ÷0.3046×V 反總÷(W× V 樣÷V 樣總)÷T =68.94×(ΔA +0.0097）÷W
（3） 按細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算：
單位的定義：每 1 萬(wàn)個(gè)細(xì)菌或細(xì)胞每小時(shí)產(chǎn)生 1μg 氨定義為一個(gè)酶活力單位。
AS 活力（μg/h/104 cell）＝(ΔA+0.0097) ÷0.3046×V 反總÷(500×V 樣÷V 樣總) ÷T=0.1379×(ΔA +0.0097)
T：反應(yīng)時(shí)間，1h； V 反總：反應(yīng)體系總體積：0.525ml；V 樣：加入反應(yīng)體系中樣本體積，0.025ml；V樣總：提取液體積，1ml；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/ml； W：樣本質(zhì)量， g；500：細(xì)菌或細(xì)胞總數(shù)， 500 萬(wàn)。
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