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高效液相色譜應用非常廣泛，幾乎遍及定量定性分析的各個領域。

(1)分離混合物

高效液相色譜法只要求樣品能制成溶液，不受樣品揮發性的限制，流動相可選擇的范圍寬，固定相的種類繁多，因而可以分離熱不穩定和非揮發性的、離解的和非離解的以及各種分子量范圍的物質。

通過與試樣預處理技術相配合，高效液相色譜法所達到的高分辨率和高靈敏度，可分離并同時測定性質上十分相近的物質，能夠分離復雜混合物中的微量成分。并且隨著固定相的發展，還可在充分保持生化物質活性的條件下完成對其的分離。

(2)生化分析

由于高效液相色譜法具有高分辨率、高靈敏度、速度快、色譜柱可反復利用，流出組分易收集等優點，因而被廣泛應用到生物化學、食品分析、醫藥研究、環境分析、無機分析等各種領域，并已成為解決生化分析問題最有前途的方法。

(3)儀器聯用

高效液相色譜儀與結構儀器的聯用是一個重要的發展方向。高效液相色譜一質譜聯用技術受到普遍重視，如分析氨基甲酸酯農藥和多核芳烴等：高效液相色譜一紅外光譜聯用也發展很快，如在環境污染分析測定水中的烴類等．使環境污染分析得到新的發展

液相色譜所用基本概念：保留值、塔板數、塔板高度、分離度、選擇性等與氣相色譜一致。液相色譜所用基本理論：塔板理論與速率方程也與氣相色譜基本一致，但由于在氣相色譜中以液體代替氣相色譜中氣體作為流動相，而液體和氣體的性質不相同。

此外，液相色譜所用的儀器設備和操作條件也與氣相色譜不同，所以，液相色譜與氣相色譜有一定的差別。

主要有以下幾力‘面：

①操作條件及應用范圍不同

對于氣相色譜，是加溫操作。僅能分析在操作溫度下能汽化而不分解的物質，對高沸點化合物、非揮發性物質、熱不穩定化合物、離子型化合物及高聚物的分離、分析較為困難，致使其應用受到一定程度的限制，據統計只有大約20%的機物能用氣相色譜分析。

而液相色譜是常溫操作，不受樣品揮發度和熱穩定性的限制，它非常適合相對分子量較大，難汽化，不易揮發或對熱敏感的物質、離子型化合物和高聚物的分離分析，大約占有機物的70%~80%。

②液相色譜能完成難度較高的分離工作

a.氣相色譜的流動相載氣是色譜惰性的，基本不參與分配平衡過程，與樣品分子無親和作用，樣品分子主要與固定相相互作用。而在液相色譜中流動相液體也與固定相爭奪樣品分子，為提高選擇性增加了一個因素。也可選擇不同比例的兩種或兩種以上的液體做流動相，增加分離的選擇性。

b.液相色譜固定相類型多，如離子交換色譜和排阻色譜等，作為分析時，選擇余地大；而氣相色譜并不可能。

c.液相色譜通常在室溫下操作，較低的溫度，一般有利于色譜分離條件的選擇。

③由于液體的擴散性比氣體的小105倍，因此，溶質在液相中的傳質速率慢，柱外效應就顯得特別重要；而在氣相色譜中，由色譜柱外區域引起的擴張可以忽略不計。

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