AAA-DirectTM氨基酸分析系統 分析氨基酸zui直接的方法
戴安公司AAA-Direct氨基酸分析儀掀起了氨基酸分析*的一次重大革新，與現存的方法不同，氨基酸不需要任何柱前柱后衍生，通過積分脈沖安培檢測器（IPAD）被直接檢測，而且具有相當高的靈敏度，該系統采用了戴安公司為氨基酸的高分辨分離專門設計的的2mm直徑的微孔陰離子交換柱Dionex　AminoPacTMPA10.
直接檢測技術的簡便性，使其能廣泛運用于蛋白的鑒定和食品分析，另外，AAA-Direct系統具有*的優點，可以用于在線的控制和過程的優化，如：大規模的細胞培養液和發酵液.
檢測方法
通過IPAD直接檢測一級和二級氨基酸.不需要柱前或柱后衍生.
采用適用于氨基酸分析的AAA-Certified金電極.
分離方法
氨基酸和氨基糖高分辨分離.
陰離子交換分離*消除了基體影響.
一次進樣氨基酸和碳水化合物同時出峰.
性能
高靈敏度-檢出限可達pmol, 至少比茚三酮方法高出50倍.
對于大部分氨基酸, 檢測器響應的線性超過三個數量級
可靠的定量分析-所測數據與陽離子交換/茚三酮氨基酸分析方法所測的數據*吻合.
可以直接了當地檢測尚很難檢測的氨基酸,如:色氨酸,半胱氨酸,胱氨酸,蛋氨酸和磷酸氨基酸.
對于如膠原蛋白之類的復雜蛋白樣品來說,是一種更快速、更便捷的方法.
樣品前處理簡單.
可以適用于任何常用的水解過程,如6M HCI, 4M甲基磺酸(MSA),過甲酸氧化/6M HCI,以及4.2M NaOH.
系統配置
高效四元梯度微孔泵和自動脫氣系統提供精確的流路和組分控制,淋洗液消耗量低
整個系統的零部件及流路由惰性的,無金屬的PEEK材料組成,可以耐腐蝕性的淋洗液和緩沖液
柱溫箱內可以放置兩根柱子,檢測池和進樣閥.
選配的樣品準備裝置使得某些操作自動化,如:準備多點校正標樣時的單一或系列稀釋,標準曲線自動產生.
經濟而且操作方便
AAA-Direct氨基酸分析儀選用2mm微孔系統,淋洗液消耗量低,這樣使操作更便利,更節約時間.IPAD的直接檢測,免除了費時的樣品衍生過程及昂貴的試劑消耗.在AAA-Direet系統中,不再需要麻煩的柱后衍生泵系統和很貴的試劑,樣品只需稀釋和過濾,圖1所示為100pmol標樣的典型譜圖.
*保留時間和檢測響應值
對氨基酸標準溶液及諸如細胞培養液,發酵液和蛋白水解液等實際樣品的分析已證明了,該系統具有優異的檢測器響應和保留時間穩定性.圖2所示是氨基酸標準混合液連續進樣100次以上檢測器響應值.圖3和圖4分別為細胞培養液介質進樣100次以上保留時間和檢測器響應的重現性.
穩定可靠的分析柱技術
AminoPac PA10微孔柱是專門用于氨基酸分離的選擇性高效陰離子交換柱.與以往的離子交換柱相比,這種柱子有很多優點:
梯度淋洗后快速再平衡.
優異的傳質特征,分離效果好.
耐酸堿(PH范圍:0-14)
機械穩定性(4000psi)和化學穩定性高,延長柱子壽命.
復雜基質進樣后,可以用常規有機溶劑快速清洗
常用的梯度程序
圖5所示為分離22種常見氨基酸的標準三元梯度.(水,0..25M氫氧化鈉,1.0M醋酸鈉).如果有特殊應用,梯度程序可以自由設定.
適用于所有標準水解過程
四種常用的水解過程,如6M HCI, 4M MSA,過甲酸氧化/6M HCI和4.2M NaOH,都適用于AAA-Direct氨基酸分析系統.另外,由于色譜保留機理是離子交換,AminoPac PA10對中性樣品組分沒有保留,這樣就*消除了基體的影響.
簡化色氨酸測定
色氨酸在常用的HCI水解過程中會分解,影響測定結果.而NaOH水解過程在柱前、柱后衍生分析方法中又比較麻煩,因為水解產物必須經中和、稀釋。.因此在陽離子交換/茚三酮方法中勢必會消耗大量樣品.另外,在衍生過程中產生的大量NaC1干擾,也是個問題.在AAA-Direct氨基酸分析系統中，因為用NaOH作為淋洗液，色氨酸經NaOH后可直接進樣分析。樣品的準備非常簡單，不需中和反應。進樣前只需進行水解產物的稀釋和過濾
同時測定氨基酸，氨基糖和碳水化合物
蛋白水解物中通常存在氨基糖。AminoPac PA10對氨基糖亦有很好的響應，因此在測定氨基酸的同時可測定氨基糖（見圖6）。
生化工業中，AAA-Direct氨基酸分析系統已經以實驗和在線方式被用于發酵池和大規模細胞培養液中氨基酸和氨基糖的直接監控.這就為蛋白和肽治療過程中氨基酸和碳水營養物的監控提供了更簡便的方法.
圖7所示為細胞培養液的分析結果.插圖為分析中所用IPAD的波形,圖中藍線為積分階段.采用此波形,能同時測定樣品中常見的氨基糖和氨基酸.如果積分階段移向更低的電壓,羥氨基酸的影響被抑制.同一樣品中的碳水化合物和羥基氨基酸能被選擇性地檢測.
圖8所示是大腸桿菌發酵液隨時間變化的一系列譜圖的疊加.各種氨基酸隨時間的變化一目了然.這對生產過程的*化非常有利，因為基本氨基酸的量可以根據需要簡便地控制和調整.
蛋白質和肽水解產物
運用AAA-Direct氨基酸分析系統,已經成功地分析了包括膠原蛋白在內的各種蛋白質和肽水解產物.檢驗數據與柱后茚三酮分析法的結果**.圖9所示為膠原蛋白水解物的色譜圖.尤其值得一提的是,所有氨基酸的定量只需一次進樣.
食品和飲料分析
該系統已經用于多種食品和飲料樣品的分析.包括未加工和加工過的肉類水解物,果汁和蔬菜汁,啤酒和紅酒.圖10所示為多種不同的未加工肉類經過MSA水解后的分析譜圖.圖11所示為紅酒中的游離氨基酸測定結果.樣品前處理非常簡單,因為IPAD的靈敏度非常高,允許樣品稀釋1000倍,甚至更高.
訂貨指南
氨基酸直接分析儀有四種不同的系統配置，適用于不同的氨基酸分析。系統1是基本配置；系統2包括了樣品配置器，可自動配置（多種水平）校正標準；系統3和系統4則另外包括了樣品冷卻裝置
標準配置
每臺AAA-Direct系統包括：
帶有真空脫氣的微孔PEEK GP50泵 P/N 054045
ED40檢測器（包括PH參比電極） P/N044094
微孔管道配件箱 P/N052324
淋洗液組織器：1個調節器
4個2L塑料瓶 P/N 054468
系統1
帶有AS50自動進樣器和加熱室的AAA-Direct分析儀
除上述的標準配置外，還包括AS50全自動選擇PEEK自動進樣器和加熱室；用于AS50的氨基酸金電極安培池；1.5ml瓶定孔轉盤自動選擇器和1包1.5ml帶有隔墊的玻璃小瓶(100個/包)

系統2
帶有AS50自動進樣器、加熱室和帶有樣品配置選擇的AAA-Direct分析儀
除上述的標準配置外，還包括AS50全自動選擇PEEK自動進樣器、加熱室和帶有樣品配置選擇，用于AS50的氨基酸金電極安培池；1.5ml瓶定孔轉盤自動選擇器和1包1.5ml帶有隔墊的玻璃小瓶(100個/包)

系統3
帶有LC25和帶有樣品冷卻選擇器的AS3500的AAA-Direct分析儀
除上述的標準配置外，還包括帶有樣品冷卻選擇器的AS3500；LC25色譜柱箱；用于LC25的氨基酸金電極安培池；1.5ml瓶定孔轉盤自動選擇器和1包1.5ml帶有隔墊的玻璃小瓶(100個/包)

系統4
帶有LC30和帶有樣品冷卻選擇器的AS3500的AAA-Direct分析儀
除上述的標準配置外，還包括帶有樣品冷卻選擇器的AS3500；LC30色譜柱箱；用于LC30的氨基酸金電極安培池；1.5ml瓶定孔轉盤自動選擇器和1包1.5ml帶有隔墊的玻璃小瓶(100個/包)

用AAA-Direct直接分析系統進行氨基酸確定，必須配備金電極電化學池，PeakNet工作站、AminoPac PA10分析柱及保護柱均需另外訂貨。

附加部件
AminoPac PA10分析柱 （2X250mm） P/N55406
AminoPac PA10保護柱 （2X50mm） P/N55407
用于AS50的氨基酸金電極安培池 P/N55826
用于LC25的氨基酸金電極安培池 P/N55827
用于LC30的氨基酸金電極安培池 P/N55828
氨基酸金工作電極 P/N55832
DX-LAN泵卡 P/N044195
檢測卡 P/N044196
PeakNet控制WindowsNT工作站 P/N054464

技術指標
柱子
尺寸：
AminoPac PA10分析柱： 2X250mm
AminoPac PA10保護柱： 2X50mm
zui大工作壓力：4000Psi
流動相兼容性：pH 0-14；0-* HPLC溶劑
樹脂粒子參數
基球直徑：8.5um
微孔尺寸：〈 10Å
交聯度：（ %DVB ）：〈55%
膠乳參數
官能團：烷基季胺鹽離子
膠乳交聯度：1%
膠乳尺寸：80nm
疏水性：疏水
重量：60 微克當量（分離柱）
12 微克當量（保護柱）
柱結構：PEEK材料
所有部件由非金屬組成
GP50 技術指標 AS50自動進樣器技術指標
適用性：梯度和等度分離構造：化學惰性，無金屬污染的peek材料；泵頭和流路適用于pH值為0-14的淋洗液和反相淋洗液。類型：雙重往復式柱塞微處理器控制連續沖程，可變流速控制方式：手動或通過繼電器遙控TTL或PeakNet軟件泵頭體積：25µL死體積（無混合器）：〈300µLzui大承受壓力：35MPa(5000psi)壓力報警限值：超出上限35 MPa(5000psi)一個單位；低于設定下限一個單位；流速準確度：設定值的±0.5%或0.2µL/min流速精密度：小于0.2%流速范圍：0.01-2.50mL/min淋洗液選擇：四種不同的流動相成分，任何一種所占比例為0-*比例準確度：±2%壓力波動：系統壓力的2.0%（系統有壓力狀態下） 樣品容量：49×10mL; 100×1.5mL樣品瓶大小：10mL和1.5mL帶裁切好瓶墊的樣品瓶每個樣品瓶可進樣次數：1-99次zui小進樣體積：在100µL微型進樣瓶中可從5µL樣品中采集1µL，在300µL微型進樣瓶中可采集10µL，在10mL微型進樣瓶中可從500µL樣品中采集20µL可變的體積范圍：1-100µL有0.1µL的增加，100-1000µL有1µL的增加注射閥：帶Tefzel轉子封口的Peek Rheodyne 閥進樣環體積：標準的25µL進樣環及其它大小的進樣環進樣精度：固定式的樣品環，進樣量為20µL 時〈0.3%的偏差，變化式的樣品環，〉0.5%的偏差稀釋精密度：1:100稀釋時為1.0%的偏差配置精密度：重量法，〈0.2%的偏差轉移法，500µL的沖洗體積時誤差〈0.01%環境溫度范圍：10-40℃濕度范圍：10-90%相對濕度，無冷凝電壓：90-265V, 47-63和Hz 功率：可在300-600瓦間選擇尺寸大小：64×30×46cm(26×12×19inch)重量：〈30kg (〈65lb)加熱箱和色譜箱技術指標大小：50×17.5×40cm(20×7×16inch)重量：色譜箱：9kg(20lb)加熱箱：18kg(40lb)加熱箱溫度控制范圍：10-40℃，偏差為±0.2℃環境操作溫度：20-40℃溫度穩定性：±0.2℃溫度準確度：±0.1℃加熱和冷卻速率：環境溫度為20℃時，在5min內可從20℃升至40℃在10min內可從40℃降至20℃死體積：zui小值〈100µL安全性：漏液傳感器和足夠的漏液處理能力，液體溢出閥樣品預備項技術指標稀釋精度：1:100稀釋時，面積偏差小于1.0%（包括稀釋和進樣）配置準確度：重量法為0.2%