酶聯免疫吸附測定（Elisa）概論

酶聯免疫吸附測定（enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA）是指將可溶性的抗原或抗體結合到聚苯乙烯等固相載體上，利用抗原抗體結合專一性進行免疫反應的定性和定量檢測方法。

酶聯免疫斑點技術 (enzyme-linked immunospot assay, ELISpot) 是細胞免疫學研究中敏感的檢測方法之一，能夠區分活化的T細胞亞群，可以在單細胞水平對抗體分泌細胞及細胞因子分泌細胞進行檢測。在疫苗研究中，ELISpot是一種標準工具，用于通過測量激發強大T細胞反應的能力 (通常是干擾素-γ的分泌) 來確定疫苗的有-效性。為滿足客戶的檢測需求，義翹神州可提供ELISA檢測服務和ELISpot檢測服務。

義翹神州提供專業的ELISA實驗檢測服務，擁有6000多種優質ELISA應用抗體，500種ELISA檢測試劑盒。

ELISA/ELISpot檢測技術服務流程

ELISpot檢測服務案例

在臨床試驗和候選疫苗中，細胞毒性T淋巴細胞（CTL）是發揮細胞免疫的一類重要細胞。而 IFN-γ 作為免疫活性細胞分泌的細胞因子在誘導抗病毒免疫中起著重要的免疫調理作用，因此 IFN-γ 的ELISpot是評價抗原特異性T細胞免疫的金標準。

ELISpot檢測小鼠T細胞經特異性肽段刺激分泌IFN-γ 的情況。

ELISpot檢測小鼠T細胞經特異性肽段刺激分泌IL-4 的情況。

ELISA/ELISpot檢測相關內容

酶聯免疫吸附測定（ELISA）和酶聯免疫斑點（ELISpot）檢測是兩種基于抗原-抗體反應的免疫學實驗技術，它們在生物醫學研究和診斷中有著廣-泛的應用。

ELISA（Enzyme-Linked Immunosorbent Assay）：

定義：ELISA是一種定性和半定量或定量檢測方法，利用抗原-抗體反應的原理，通過酶標記的抗體來檢測特定抗原或抗體的存在和量5758。

試驗原理：

抗原或抗體被固定在固相載體（通常是96孔板）上。

加入特異性抗體，這些抗體會與固相載體上的抗原或抗體結合。

清洗去除未結合的抗體。

加入酶標記的二抗體，它與固相上的抗體結合。

再次清洗去除未結合的二抗體。

加入酶的底物，酶催化底物產生可檢測的信號（如顏色變化或熒光）。

通過光度計測定吸光度或熒光強度，從而定量分析目標分子的濃度。

Tips：

• 需要特異性的抗體對。

• 可進行直接ELISA（抗原固定后直接使用酶標記的抗體檢測）或間接ELISA（使用非標記的一抗后，再用酶標記的二抗檢測）。

• 夾心ELISA可以同時使用兩種特異性抗體夾住抗原。

• 競爭ELISA中，樣本中的抗原與標記抗原競爭有限的抗體結合位點。

• 可用于高通量篩選和定量分析。

• 需要控制實驗條件，如孵育時間和溫度，以確保結果的準確性。

ELISpot（Enzyme-Linked ImmunoSpot Assay）：

定義：ELISpot是一種高靈敏度的細胞免疫學檢測技術，用于檢測單個細胞分泌特定蛋白質（如細胞因子）的能力5051。

試驗原理：

使用特異性捕獲抗體預先包被固相載體（通常是PVDF膜的孔板）。

將細胞與刺激物一起孵育在包被的孔中，細胞在刺激下分泌特定蛋白質。

分泌的蛋白質被固相上的捕獲抗體捕獲，形成斑點。

清洗去除未結合的細胞和蛋白質。

加入生物-素標記的檢測抗體，與捕獲的蛋白質結合。

加入鏈霉親和素-酶偶聯物，與生物-素標記的抗體結合。

加入顯色底物，酶催化底物產生不溶性色素，形成可見斑點。

斑點的數量和強度與分泌細胞的數量和活性成正比。

Tips：

• 可在單細胞水平上檢測細胞因子的分泌。

• 高靈敏度和特異性，可以檢測極少量的細胞因子。

• 斑點的數量代表分泌特定蛋白質的細胞數量。

• 可用于評估疫苗效果、細胞免疫反應、自身免疫疾病研究等。

• 實驗操作需要嚴格控制，包括細胞培養條件、刺激物的選擇、孵育時間等。

• 需要使用專門的讀板儀和分析軟件來計數和分析斑點。

這兩種技術各有特點，ELISA適合于定量分析樣本中的蛋白質濃度，而ELISpot更適合于評估細胞免疫反應和檢測單個細胞的活性。

詳細信息可查看義翹神州，或者可加微信“sinobio2023”進行聯系。